HiScript II Q RT SuperMix for qPCR (+g DNA wiper)
R223
PN | Product Name | Size | Price (TWD) |
R223-01 | HiScript II Q RT SuperMix for qPCR (+g DNA wiper) | 100 rxn (20 μl/rxn) |
9,030 |
a. 包含Buffer、dNTP、HiScript II Reverse Transcriptase、RNase inhibitor、Random primers/Oligo (dT)23 primer mix。
注意:與HiScript II Q RT SuperMix for qPCR (R222-01) 中所带的5 ×HiScript II qRT SuperMix成分不同,不可以混用。
b. 除不含HiScript II Reverse Transcriptase外,其餘成分與5 ×HiScript II qRT SuperMix II相同,用於配製No RT對照反應,排除基因组残留。
優勢
• 高效HiScript II Reverse Transcriptase,超強溫度耐受力在高溫條件下能打開RNA複雜二級結構,得到更長cDNA
• 寬廣的模板起始量範圍,從1 pg-5 μg總RNA,可擴增片段長達15 kb以上
• 高穩定性:建議反應溫度42-55℃
• Anchored Oligo-dT (23) 設計獨特,確保反應特異性,提高第一鏈cDNA合成效率和成功率
• 即用型的5x HiScript II qRT SuperMix II 反轉錄預混液使用方便省時
• gDNA wiper Mix可迅速徹底去除基因組污染
說明
HiScript II兩步法qPCR試劑盒以高性價比的HiScript II Reverse Transcriptase為基礎,使用設計獨特的Oligo (dT)23引物,提高了反應特異性及靈敏度,獲得質量更好的cDNA。同時對反應體系進行大幅簡化,即用型的SuperMix將合成高質量第一鏈cDNA所需的所有成分合併為一管5 × SuperMix,只需加入RNA和水即可進行逆轉錄反應,RNA體積最多可加至反應總體積的80%,非常適合於低濃度RNA模板的逆轉錄反應,且SuperMix在-20℃不會凍結,使用方便。產品中的4 × gDNA wiper可在逆轉錄步驟前快速徹底去除基因組污染,提高實驗結果的可信度。
本產品操作簡便,降低操作過程中的污染機率。合成的cDNA可以用於SYBR Green qPCR分析法和探針分析法,可以根據實驗目的與AceQ qPCR SYBR Green Master Mix(Vazyme #Q111)、ChamQ qPCR SYBR Green Master Mix(Vazyme #Q311)和AceQ qPCR Probe Master Mix (Vazyme #Q112) 等定量試劑配合使用,進行高性能的基因表達分析。
實驗範例
圖1. HiScript II 兩步法RT-PCR/qPCR系列試劑盒對逆轉錄反應體系做了大幅簡化,特別是即用型的SuperMix預混液,只需加入RNA即可立刻開始反應。
圖2. gDNA wiper快速去除基因組原理說明。
簡易流程
步驟1. 去除gDNA 殘留汙染
pipetting 混勻後 (不要vortex)
incubate at 42℃ for 2 min. 去除gDNA 殘留汙染
步驟 2 加入RT 預混液
pipetting 混勻後
pipetting 混勻後 (不要vortex)
步驟 3 反轉錄反應
*無論RT後的產物有無稀釋,反轉錄試劑內的成分完全不影響後續qPCR實驗
Performed by ChamGE Probe qPCR Master Mix(CGE) and TaqMan POLR2A Human Gene Assay
*在反應體積不變的情況下,RNA Input總量增加,RT效率是一致的
Performed by ChamQ Universal U+qPCR Probe Master Mix (Q713) and TaqMan GAPDH, POLR2A Human Gene Assay
文獻發表
• Wu N, Ming X, et al. TBX6 null variants and a common hypomorphic allele in congenital scoliosis. N Engl J Med, 2015, 4793:341-350. IF: 59
• Ge J, Li W, et al. Architecture of the mammalian mechanosensitive Piezo1 channel. Nature , 2015, 527(7576):64. IF:38
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簡易流程
步驟1. 去除gDNA 殘留汙染
Items | uL | Conc./Amount |
ddH2O | 16-4-X | ---- |
4X gDNA Wiper | 4 | 1X |
Template RNA | X | 1pg~1ug |
Step 1 Total | 16 |
incubate at 42℃ for 2 min. 去除gDNA 殘留汙染
Temp | Time |
42°C | 2 min |
步驟 2 加入RT 預混液
pipetting 混勻後
Items | uL | Conc./Amount |
Step 1 Total | 16 | ---- |
5X HiScript II qRT SuperMix II |
4 | 1X |
Final Total | 20 |
步驟 3 反轉錄反應
Temp | Time |
50°C | 15 min |
85°C | 5 sec |
*無論RT後的產物有無稀釋,反轉錄試劑內的成分完全不影響後續qPCR實驗
*在反應體積不變的情況下,RNA Input總量增加,RT效率是一致的
文獻發表
• Wu N, Ming X, et al. TBX6 null variants and a common hypomorphic allele in congenital scoliosis. N Engl J Med, 2015, 4793:341-350. IF: 59
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